标题:细胞显微针的制备过程-立体体视思思热99re热在线视频厂家

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正文:

细胞显微针的制备过程-立体体视思思热99re热在线视频厂家

DNA ES细胞显微注射针及固定针之制备


材料
1.拉针器(Flaming/Brown Micropipette Puller, Model. P-97, SUTTER INSTRUMENT COMPANY)
2.显微针烧针器(Microforge, Narishigi Co.)
3.毛细管 (10 公分长,外径 1.0 mm,内径 0.75 mm)
实验步骤 I  (显微注射针之制备)

1.将毛细管架于拉针器上。
2.以参数 Heat 321,Pull 80,Velocity 100,Time 100进行拉针。
3.完成之显微注射针之大小如下图。
4. DNA显微注射针以好用为原则,B 值太大易伤害受精卵,太小则开口易阻塞,故使用者仍应多次尝试、调整最恰当的参数。
5. 参数Pull越大,A值越大且B值越小;Velocity越大θ越小。

实验步骤 II  (固定针之制备)
1.将毛细管架于拉针器上。
2.以参数 Heat 321,Pull 80,Velocity 100,Time 100 进行拉针。完成之显微针大小约如下: 
3.将针架至烧针器上。
4.调整显微针使在视野下清晰可见,并且维持水平不倾斜。
5.将绕有玻璃球的白金丝移入焦距中,令玻璃球和显微针皆清晰可见。
6.移动玻璃球,使玻璃球和显微针接触,且接触点在视野焦距中为一切点;又接触点的针内径恰为
 80-120 mm(视野中可见刻度约5格单位大小)。

7.踩踏脚踏板使白金丝加热(加热强度约40%~50%),见玻璃球泛红后,迅速移动显微针使其和玻璃球
 接触,并于接触瞬间放开脚踏板,中断加热,显微针会因热胀冷缩而断裂。如下所示
8.将断裂黏于玻璃球上之部份显微针夹除。
9.移动玻璃球至显微针正前方。
10.踩踏脚踏板使白金丝加热(调整加热强度约为70%~80%),渐渐靠近显微针,利用热源修整显微针
 之断面至圆滑,且开口内径仅为10 mm左右(视野可见刻度约为1格单位),切记加热之玻璃球
 不可接触到显微针










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